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实验笔记丨CRISPR-dCas9实验步骤详解
载体酶切 准备灭菌的PCR离心管，配制酶切体系，放置PCR仪，孵育3小时，终止酶切后使用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。琼脂糖凝胶DNA回收 将吸附柱置于收集管中，加入Buffer BL，离心活化硅胶膜；在紫外灯下，用刀片切下目的条带，尽量去除非目的DNA，确保体积最小。
sgRNA设计流程包括以下原则： sgRNA长度：SpCas9一般为20nt。 sgRNA序列碱基组成：基因特异的sgRNA模板序列位于PAM序列前，PAM序列特征为NGG （N为任意核苷酸），选择3末端含有GG的sgRNA，可构成PAM序列。sgRNA序列应避免以4个以上的T结尾，GC含量最佳为30%-70%（40%-60%）。
实验流程介绍 天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组成：SpCas9 （简称Cas9）、crRNA、tracrRNA。tracrRNA（在CRISPR-Cas9编辑技术中被优化并命名为gRNA scaffold），它负责与Cas9结合，与重复序列具有同源性。crRNA为引导序列，约20个碱基，具有特异性。
前阵子才写道 ： CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 Month 4 --可能的收官之帖（但还远未结束） 说自己收官之作，哪里想到这么快就要继续开始新的实验了。
今年几月几号白露2023
年白露开始时间：9月8日05：26：31 2023年白露结束时间：9月23日14：49：46 2023年白露农历时间：七月廿四 2023年白露星期时间：周五 白露：全年昼夜温差最大的节气 白露，是“二十四节气”中的第15个节气，秋季第3个节气，一般在公历9月7-9日开始。“白露”是反映自然界寒气增长的重要节气。
年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露节气，大部分地区温度降低。白露是秋天的第三个节气，表示孟秋时节的结束和仲秋时节的开始。这时，人们就会明显地感觉到炎热的夏天已过，而凉爽的秋天已经到来了。
年白露开始时间：09月08日05：26：31，星期五，农历七月廿四；2023年白露结束时间：09月23日14：49：46，星期六，农历八月初九。白露是农历二十四节气之一，当太阳到达黄经一百六十五度时为白露节气。白露是秋天的第三个节气，表示孟秋时节的结束和仲秋时节的开始。
年白露时间：2023年9月8日05：26：31，农历七月廿四。白露，干支历申月的结束与酉月的起始。斗指癸；太阳达黄经165度；于公历9月7-9日交节。白露节气，是反映自然界寒气增长的重要节气。由于天气逐渐转凉，白昼有阳光尚热，但傍晚后气温便很快下降，昼夜温差大。
白露是秋季的节气，2023白露公历时间：9月8日5点26分31秒，农历七月廿四号，星期五。白露是秋季的第三个节气，属于孟秋时节的结束和仲秋时节的开始，也就是开始进入秋天中期。这个时候夏季的暑热才是真正消散，寒气渐深，温差变大。
淘宝白黒号是什么意思?黑号有何影响?
淘宝白号就是注册出来之后没有买过东西的，也就是没有点数的号，一般买过东西之后得到卖家的好评之后就会有点数，那个时候就已经不是白号了，白嘛就是干干净净的那种，但是现在的意思有点不一样，好像只要不是1心的都叫做白号吧。黑号：所谓黑号，在淘宝官方并没有这一规则和定义。
淘宝白号是指淘宝账号的一种状态，即该账号没有任何违规记录，权重较高，可以享受淘宝平台的一些优惠政策和服务。淘宝白号与黑号相对，黑号通常是因为账号存在违规行为，如刷单、恶意评价、售假等行为，被淘宝平台标记并限制其部分功能或降低其权重。
淘宝白号：没有购买，没有信誉，没有实名。淘宝红号：一般指交易过多超出正常范围，超过20单。淘宝黑号：频繁参与虚假交易，信誉度高，被淘宝监控。
淘宝白号就是没有购买、信誉、实名的账号。黑号就是频繁参与虚假交易、钻淘宝系统bug、退款、购买白菜单等等，导致被淘宝监控的账号。
几号白露2023
1、年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露节气过偶，大部分地区温度降低。白露是秋天的第三个节气，表示孟秋时节的结束和仲秋时节的开始。这时，人们就会明显地感觉到炎热的夏天已过，而凉爽的秋天已经到来了，要注意多穿些衣物。白露含义白露代表天气渐渐转凉。
2、年白露开始时间：9月8日05：26：31 2023年白露结束时间：9月23日14：49：46 2023年白露农历时间：七月廿四 2023年白露星期时间：周五 白露：全年昼夜温差最大的节气 白露，是“二十四节气”中的第15个节气，秋季第3个节气，一般在公历9月7-9日开始。“白露”是反映自然界寒气增长的重要节气。
3、白露是秋季的节气，2023白露公历时间：9月8日5点26分31秒，农历七月廿四号，星期五。白露是秋季的第三个节气，属于孟秋时节的结束和仲秋时节的开始，也就是开始进入秋天中期。这个时候夏季的暑热才是真正消散，寒气渐深，温差变大。
闲置的沃尔玛购物卡哪里回收?
1、通过门店回收 前往最近的沃尔玛门店：找到您附近的门店，并前往客服中心。咨询沃尔玛购物卡回收政策：与客服人员沟通，了解沃尔玛购物卡回收的具体政策和操作流程，包括可能涉及的手续费或回收时间。通过朋友或亲戚转让 找到接手人：在您的亲友圈中寻找对沃尔玛购物卡有需求的人。
2、沃尔玛购物卡可以通过多种方式进行回收。以下是一些主要的回收方法：线上回收平台 微信小程序或公众号 线下回收点：如果您不太熟悉网络操作，可以选择线下回收。在沃尔玛线下门店附近，可能会发现一些专门的沃尔玛购物卡回收点 。
3、沃尔玛购物卡线上回收方法 ：第一步：微信搜索“京顺回收”公众号，选择卡券转让；第二步：点击电商卡，选择沃尔玛购物卡；第三步：选择正确的面值，输入卡号和卡密，点击立即兑换提交；第四步：等待几分钟后，个人中心提现到账。二手交易平台：另一个可行的方法是在二手交易平台上出售沃尔玛购物卡。
4、关于沃尔玛购物卡的回收方式，主要有以下几种途径：选择卡券回收平台：例如，你可以通过京顺回收公众号进行回收。在京顺回收公众号中，你可以搜索沃尔玛，选择面值，输入卡号卡密，提交订单。
5、在面对沃尔玛卡2326需要回收时，寻找一个可靠且合适的回收平台成为关键。市场上回收平台众多，让人眼花缭乱，而其中规模最大的当属淘淘收。当我们提及回收平台的“大”，它往往体现在多个方面。
6、沃尔玛购物卡可以通过多种方式进行回收变现，具体如下： 线上回收平台：互联网上有许多专业的卡券回收平台，如京顺回收，您可以在这些平台上注册账号并按照指引提交沃尔玛购物卡的卡号和密码等信息，经过审核后，您可以进行提现操作，资金通常会很快到账。
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